提到配制細胞培養基，你能想到啥？

營養成分和緩沖體系多數情況下都是必要的，但這抗生素，真的是必要的嗎？有了抗生素，細胞就無懼污染了嗎？

關于抗生素在細胞培養過程中的意義，一直都有很矛盾，不用細胞容易污染，一直用對細胞狀態也會有影響，到底該怎么辦？今天我們就來一探究竟。

抗生素對細胞的影響

很多同學養細胞的手藝，都是從師兄師姐那里「傳承」來的，由于沒有辦法做到絕對的無菌，所以從經驗角度出發，前輩們都會告訴剛開始養細胞的同學，可以在配制培養基的時候，加入1%左右的雙抗，防止細胞出現細菌污染（有些時候甚至出現離開抗生素，細胞沒過幾天立馬就被污染的情況）。

這就造成一些小伙伴在培養基中「預防性添加抗生素」，其實圖的就是個心安，抱著「有了抗生素就不怕污染」的心態。但事實上，抗生素并不能一勞永逸，真菌、支原體這些污染是它不能夠對抗的，甚至濫用還會適得其反。

這抗生素對細胞有什么影響呢？

早在十幾年前，就有很多報導指出β-內酰胺類抗生素及氨基糖甙類抗生素，對真核細胞培養有抑制增殖作用[1]。并且這種抑制增殖作用在原代細胞和干細胞等難養細胞上尤其明顯[2-3]。2017年，加州大學Nadav Ahituv博士在Scientific Reports上發表文章，呼吁在細胞培養過程中減少抗生素的使用[4]。他們發現抗生素（雙抗：青霉素和鏈霉素）的使用影響人體肝細胞中基因表達與基因調控。其中有209個基因的表達發生了改變，特別是與藥物和應激反應相關的基因。超過9,500個基因調控元件發生了變化，并且很多調節元件位于參與細胞分化，核酸酶活性和tRNA修飾的基因附近。雖然這些基因的數量在龐大的細胞基因庫中不值一提，但這絕對不是一個應該被忽略的事件。

雖然抗生素對真核細胞生長的影響機制至今尚未明確，但是為了細胞更好的生長，實驗結果更加準確，實驗數據更加穩定，在實驗過程中盡量不要隨意使用。

參考文獻：

[1] KA Neftel, Hubscher, U. Effects of beta-lactam antibiotics on proliferating eucaryotic cells.[J]. Antimicrobial Agents & Chemotherapy, 1987, 31(11):1657-61.

[2] Varghese D S , Parween S , Ardah M T , et al. Effects of Aminoglycoside Antibiotics on Human Embryonic Stem Cell Viability during Differentiation In Vitro[J]. Stem Cells Int, 2017, 2017:1-18.

[3] Nygaard U H , Niehues H , Rikken G , et al. Antibiotics in cell culture: friend or foe? Suppression of keratinocyte growth and differentiation in monolayer cultures and 3D skin models[J]. Experimental Dermatology, 2016, 24(12):964-965.

[4] Ryu A H , Eckalbar W L , Kreimer A , et al. Use antibiotics in cell culture with caution: genome-wide identification of antibiotic-induced changes in gene expression and regulation[J]. Scientific Reports, 2017, 7(1):7533.

如何有效避免污染？

抗生素對細胞有一定傷害，但是不加抗生素又要怎樣避免實驗出現污染的狀況呢？

1、實驗環境（包括培養箱內部、冰箱、超凈臺）要進行定期的消毒，用消毒液（75%乙醇溶液、新潔爾滅等）擦拭地面墻面桌面等地方，不留衛生死角；紫外線照射30分鐘以上。

2、定期用支原體祛除試劑清潔超凈臺臺、桌面等地方。

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3、培養箱、水浴鍋的水槽要定期清潔，用支原體預防試劑處理。

4、細胞房實驗要用專用的實驗服：進入細胞房正式實驗前須換上專用防護服、專用鞋或鞋套。

5、實驗廢料不在細胞房堆積，及時清理。

6、遵照細胞實驗操作方法，實驗過程中嚴格無菌操作。

另外，選擇一款合格的實驗試劑也很重要。就拿血清來說，合格的血清產品，一定要有明確的檢測報告，指出微生物檢測情況。

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