RNA剪接（RNA splicing）是指從DNA模板鏈轉(zhuǎn)錄出的最初轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物中除去內(nèi)含子，并將外顯子連接起來形成一個連續(xù)的RNA分子的過程。

RNA剪接機制的研究 ，是80年代生物化學和分子生物學領(lǐng)域中最有生機的研究課題之一，它不僅解決不連續(xù)基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的剪接問題，而且對于了解不連續(xù)基因的起源乃至整個生命起源與進化問題都是有力的推動。

另外，核酸分子的催化功能的發(fā)現(xiàn)拓寬了人們對于酶的認識。

造血干細胞發(fā)生過程中的RNA可變剪接

近日，發(fā)表在《Science Advances》上的一篇名為：“Single-cell architecture and functional requirement of alternative splicing during hematopoietic stem cell formation”的文章，揭示了造血干細胞發(fā)生過程中的RNA可變剪接。

第一個造血干細胞(HSCs)產(chǎn)生于哺乳動物胚胎發(fā)育期間的主動脈-性腺-中腎(AGM)區(qū)域。血統(tǒng)追蹤和實時體內(nèi)觀察表明，造血干細胞來自于造血內(nèi)皮細胞(HECs)，這是一種沿背主動脈腹壁的短暫群體。

最近，這些細胞被分離出來，并以單細胞轉(zhuǎn)錄組學為基礎(chǔ)，繪制了小鼠HSC發(fā)育全程的RNA剪接圖譜，并對內(nèi)皮細胞向造血細胞的轉(zhuǎn)變（EHT）過程中，出現(xiàn)的關(guān)鍵可變剪接（alternative splicing, AS）及其上游調(diào)控因素進行探究，鑒定出Srsf2因子——通過調(diào)控造血細胞特異性AS事件促進HSC發(fā)生的新機制。

結(jié)果1

從AS角度解析T1 pre-HSC所呈現(xiàn)的尤為顯著的轉(zhuǎn)錄本多樣性：

• AS頻率在T1 pre-HSC時期到達dian峰，與顯著的轉(zhuǎn)錄本多樣性一致。

結(jié)果2

EHT期間轉(zhuǎn)錄異構(gòu)體豐度的功能相關(guān)差異：

• 84%的HEC和73%的T1 pre-HSC特征亞型(signature isoforms)是蛋白質(zhì)編碼轉(zhuǎn)錄本，負責各種RNA代謝過程相關(guān)功能。

結(jié)果3

一系列AS事件介導了EHT中的轉(zhuǎn)錄多樣性：

• 與AECs相比，“剪接體”途徑的基因表達在HEC中更為豐富。

結(jié)果4

血源特異性包括AS事件是可在體內(nèi)檢測到的，是體外造血細胞生成所必需的。

結(jié)果5

Srsf2在內(nèi)皮階段的缺失會破壞EHT。

結(jié)果6

Srsf2協(xié)調(diào)造血特異性AS事件：

• Srsf2通過調(diào)節(jié)EHT過程中關(guān)鍵基因的剪接模式，從而在HSC發(fā)生中發(fā)揮作用。

這項研究中，用到了RNA FISH、qPCR等高精度分子實驗，這些實驗比較容易收到外源DNA、RNA的干擾，因此，為了保證實驗的準確性，如何祛除外源干擾，十分關(guān)鍵。

給大家推薦一款神器——PCR Clean™噴霧劑

能夠有效清除DNA或RNA污染：

• 1分鐘起效；

• 保護實驗人員與實驗材料，避免接觸DNA污染；

• 非堿性，無致癌性，成分安全。

PCR Clean™噴霧劑使用方法：

1. 將PCR Clean™噴在操作臺表面，反應(yīng)1分鐘后，即可用干凈紙巾擦干試劑。注意：如果沒有擦拭干凈，液體揮發(fā)后表面可能有白色殘留，影響美觀。此時可用噴壺噴灑蒸餾水到白色殘留處，然后擦拭即可。

2. 對于移液器要祛除DNA/RNA污染時，請按照說明書拆開移液器，將移液器桿軸浸泡在PCR Clean™噴霧劑中， 1分鐘后取出后用水沖洗，晾干，重新組合。

3. 將PCR Clean™桶裝，可用于補充到噴霧劑瓶中，或用于潔凈間地板等大面積清除DNA/RNA污染。