細(xì)胞培養(yǎng)怕支原體污染，但有一些被污染的細(xì)胞不能被丟棄時(shí)該怎么辦？今天小編把上慣用的一個(gè)小絕招教給你，簡(jiǎn)單有效！

如何祛除細(xì)胞上的支原體污染？

據(jù)研究表明，約98％的支原體存在于細(xì)胞表面和細(xì)胞間隙。支原體直徑約180~350nm，比細(xì)胞小很多，經(jīng)低速離心與細(xì)胞分離。通過(guò)反復(fù)懸浮沖洗、離心，加上使用我們的Zell Shield®，即可在細(xì)胞培養(yǎng)四代以內(nèi)有效地祛除支原體。

什么是Zell Shield®？

Zell Shield®是一種鏈青霉素類復(fù)合抗生素，

對(duì)細(xì)胞影響很小，可以有效抑制細(xì)胞培養(yǎng)中的

支原體、細(xì)菌、霉菌、真菌等微生物增殖。

普通的鏈霉素、青霉素對(duì)支原體沒(méi)有效果。

那為什么Zell Shield®有效呢？

因?yàn)閆ell Shield®是由Minerva公司生產(chǎn)的專門針對(duì)支原體的抗生素。

德國(guó)Minerva公司是由著名的羅伯特·科赫研究所中分離出來(lái)的，專注于支原體、細(xì)菌的污染控制，尤其以支原體和軍團(tuán)菌的祛除、檢測(cè)而聞名。Zell Shield®是Minerva公司的一產(chǎn)品，不但對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)中的細(xì)菌、真菌、霉菌有效，更是對(duì)支原體的祛除有確切效果。

具體是怎么操作呢？

1.首先把被支原體污染的細(xì)胞消化下來(lái)，

放入離心管離心，棄上清。

再加入干凈的PBS懸浮沖洗細(xì)胞、

低速離心（300~500r/min）、棄上清，

反復(fù)三次。

這樣可祛除細(xì)胞表面60％~70％的支原體，

支原體還剩約30％~40％.

2.細(xì)胞加入含1％Zell Shield®的新鮮培養(yǎng)基，

傳代培養(yǎng)。

這時(shí)因培養(yǎng)基中Zell Shield®的抑制作用

細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，

雖然細(xì)胞增殖，但殘留的支原體無(wú)法增殖。

細(xì)胞需再次傳代時(shí)，把第二代細(xì)胞消化下來(lái)，

離心，棄上清。

加入新鮮PBS懸浮沖洗、再離心、棄上清，

反復(fù)三次，

這時(shí)，細(xì)胞上殘留的支原體大約已剩余為初污染量的10％左右。

3.細(xì)胞加入含1％Zell Shield®的新鮮培養(yǎng)基，

傳代培養(yǎng)。

需再次傳代時(shí)把第三代細(xì)胞消化下來(lái)，

離心，棄上清。

加入新鮮PBS懸浮沖洗、再離心、棄上清，

反復(fù)三次，

可再次祛除60％~70％的殘余支原體，

通過(guò)沖洗、抑制、換液等操作，

細(xì)胞中支原體的殘留污染量大約只剩3％左右。

4.細(xì)胞加入含1％Zell Shield®的新鮮培養(yǎng)基，

傳代培養(yǎng)。

需再次傳代時(shí)把第四代細(xì)胞消化下來(lái)，

離心，棄上清。

加入新鮮PBS懸浮沖洗、再離心、棄上清，

反復(fù)三次，

可再次祛除60％~70％的支原體，

此時(shí)，支原體殘留量大約已低于1％.

支原體的增殖亦有密度要求，

用Zell Shield®處理過(guò)四代的細(xì)胞，

即便撤掉Zell Shield®，

只要保證沒(méi)有新的支原體人為再次帶入，

原有支原體也無(wú)法再增殖，

隨著傳代，換液，支原體的老化、死亡，

細(xì)胞中的支原體污染基本就*解決了。

敲黑板，劃重點(diǎn)啦

1.每次傳代時(shí)，重復(fù)三次對(duì)細(xì)胞懸浮沖洗步驟非常重要，操作要正確、規(guī)范，以達(dá)很好效果！

2.在培養(yǎng)基中加入1％Zell Shield®抑制支原體增殖！

3.使用安全的血清、培養(yǎng)基等試劑，不再有新的支原體加入！

做到以上三點(diǎn)即可確保祛除支原體污染。

Zell Shield®工作原理是什么？

支原體祛除劑Zell Shield®（培養(yǎng)基用）

是一種即用型鏈青霉素類的復(fù)合抗生素，

在培養(yǎng)基中1%的濃度

通過(guò)阻止原核生物DNA及蛋白的合成，

抑制細(xì)胞培養(yǎng)中遇到的

細(xì)菌、真菌、霉菌增殖，

更可以有效、精確地抑制支原體增殖，

且對(duì)細(xì)胞基本安全。

品名：支原體祛除劑Zell Shield®（培養(yǎng)基用）

生產(chǎn)商：Minerva Biolabs GmbH

生產(chǎn)地：德國(guó)

貨號(hào)：13-0050

規(guī)格：50mL/瓶

儲(chǔ)存溫度：-18℃

使用注意事項(xiàng)：實(shí)驗(yàn)室初次使用，注意分裝，分裝后的小包裝Zell Shield®仍-20℃避光冷凍保存，現(xiàn)配現(xiàn)用。

貨期：大多數(shù)時(shí)間國(guó)內(nèi)有現(xiàn)貨